PYK2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422493-ACT

Das Mausgen **Ptk2b** kodiert **PYK2**, eine nicht-rezeptorische Tyrosinkinase, die durch **Ca²⁺-Flüsse** und die **Bindung von Integrinen** aktiviert wird und die Signalübertragung an **Fokaladhäsionen** sowie an Schnittstellen zum **Zytoskelett** koordiniert. PYK2 integriert Signale von **GPCRs**, **Wachstumsfaktorrezeptoren** und **Immunrezeptoren**, um **Zelladhäsion**, **Migration** und **Überleben** zu regulieren, und greift in Signalwege ein, darunter **Src-Familien-Kinasen**, **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** und **Rho-GTPase**-Signalgebung. In hämatopoetischen und myeloischen Kontexten beeinflusst **Ptk2b** entzündliche Signalprozesse und die Motilität von Phagozyten, während es in neuronalen Zellen zu synaptischen und aktivitätsabhängigen Signalprogrammen beiträgt. Eine fehlregulierte PYK2-Aktivität sowie genetische Assoziationen von **PTK2B** wurden in der Literatur mit immunvermittelten und neurodegenerationsrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht und stützen mechanistische Untersuchungen von Signalnetzwerken und zellulären Phänotypen.

PYK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ptk2b-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PYK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ptk2b-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ptk2b-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PYK2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ptk2b-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PYK2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PYK2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ptk2b-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.