Plasmide CRISPR d'Activation (h) Purα: sc-403760-ACT

PURA code pour Purα, une protéine se liant de manière spécifique à l’ADN simple brin et à l’ARN, qui coordonne la régulation transcriptionnelle, la réplication de l’ADN et le transport/la traduction des ARNm. Purα participe au contrôle du cycle cellulaire et au maintien du génome, et est enrichie dans les contextes neuronaux où elle influence la dynamique des granules d’ARN et la fonction synaptique. La dérégulation de PURA a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une excitabilité neuronale altérée, et le métabolisme de l’ARN dépendant de Purα relie ce facteur à des voies plus larges régissant la synthèse protéique et les réponses au stress. Ces propriétés font de PURA une cible utile pour étudier les programmes d’expression génique et les interactions ARN-protéine pertinents pour la biologie du système nerveux.

Purα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PURA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Purα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PURA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PURA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Purα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PURA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Purα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Purα dans les cellules tumorales présentant une expression de PURA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.