Plásmido Doble Nickase (h) PUMAα/β: sc-400464-NIC

BBC3 codifica PUMAα/β (modulador de la apoptosis regulado al alza por p53), una proteína de la familia BCL-2 que contiene solo el dominio BH3 y que actúa como un potente iniciador de la apoptosis intrínseca mitocondrial. PUMA promueve la permeabilización de la membrana externa mitocondrial al neutralizar proteínas BCL-2 antiapoptóticas y activar BAX/BAK, lo que conduce a la liberación de citocromo c y a la activación de caspasas. Su expresión se induce transcripcionalmente por p53 en respuesta al daño del ADN y a otros tipos de estrés celular, conectando la señalización genotóxica con el compromiso apoptótico, y además interactúa con programas más amplios de respuesta al estrés que influyen en las decisiones sobre el destino celular. La desregulación de la señalización de BBC3/PUMA está implicada en la biología del cáncer, la neurodegeneración y el daño tisular, contextos en los que los umbrales alterados de apoptosis contribuyen a fenotipos asociados a la enfermedad.

PUMAα/β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BBC3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BBC3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BBC3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BBC3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.