PSM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401947

Panoramica

FOLH1 codifica l’antigene di membrana specifico della prostata (PSM), una metallopeptidasi transmembrana di tipo II con attività di folato idrolasi e di NAALADasi, che modula la disponibilità extracellulare di glutammato e il metabolismo dei folati. Il PSM partecipa all’elaborazione, dipendente da peptidasi, di folati poliglutammati e neuropeptidi, influenzando la segnalazione degli amminoacidi e la gestione dei nutrienti alla superficie cellulare. Nell’uomo, l’espressione di FOLH1 è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare in biologia prostatica ed è rilevabile anche nella neovascolarizzazione associata ai tumori, risultando quindi rilevante per studi sulla segnalazione delle cellule tumorali, sulle interazioni con il microambiente e sulla regolazione specifica di linea. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di PSM sono state collegate a cambiamenti patologici del metabolismo e del traffico mediato da recettori, supportando indagini meccanicistiche in modelli di oncologia e neurobiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FOLH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FOLH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FOLH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FOLH1 per lo studio della segnalazione di PSM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FOLH1 critici per la funzione di PSM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FOLH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PSM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FOLH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PSM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FOLH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FOLH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.