Psf3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406717

Visão geral

GINS3 codifica Psf3, uma subunidade central do complexo GINS heterotetramérico, que coopera com CDC45 e com a helicase MCM2–7 para formar a helicase replicativa CMG, necessária para a ativação das origens e para a replicação processiva do DNA. Ao sustentar a progressão da forquilha de replicação e a coordenação com a sinalização do checkpoint da fase S, Psf3 ajuda a manter a estabilidade do genoma durante a progressão do ciclo celular. A perturbação da atividade do complexo GINS está associada a estresse replicativo, capacidade proliferativa alterada e respostas a danos no DNA, frequentemente exploradas em estudos de transformação oncogênica. Como fator de replicação com expressão regulada pelo ciclo celular, GINS3 é amplamente utilizado como ponto de partida molecular para investigar a dinâmica da replicação, a montagem do replissomo associado à cromatina e vias que protegem a integridade do DNA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Psf3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GINS3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GINS3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GINS3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Psf3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GINS3 para a investigação da sinalização de Psf3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GINS3 críticos para a função Psf3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GINS3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Psf3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Psf3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GINS3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Psf3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Psf3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GINS3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GINS3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.