Psf3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406717

Übersicht

GINS3 kodiert Psf3, eine zentrale Untereinheit des heterotetrameren GINS-Komplexes, der mit CDC45 und der MCM2–7-Helikase zusammenwirkt, um die CMG-Replikationshelikase zu bilden, die für das „Origin Firing“ und eine prozessive DNA-Replikation erforderlich ist. Indem Psf3 das Fortschreiten der Replikationsgabel unterstützt und mit der S‑Phasen-Checkpoint-Signalgebung koordiniert, trägt es zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität während des Zellzyklus bei. Eine Störung der GINS-Komplex-Aktivität wird mit Replikationsstress, veränderter Proliferationsfähigkeit und DNA-Schadensantworten in Verbindung gebracht, die in Studien zur onkogenen Transformation häufig genutzt werden. Als Replikationsfaktor mit zellzyklusregulierter Expression wird GINS3 häufig als molekularer Ansatzpunkt verwendet, um Replikationsdynamiken, den chromatinassoziierten Aufbau des Replisoms und Signalwege zu untersuchen, die die DNA-Integrität schützen.

Das Psf3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GINS3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GINS3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GINS3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Psf3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GINS3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Psf3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GINS3-Exone abzielen, die für die Psf3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GINS3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Psf3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Psf3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GINS3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Psf3 HDR-Plasmid (h) und Psf3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GINS3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GINS3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.