Prothrombin Double Nickase Plasmid (h): sc-400962-NIC

F2 kodiert das humane Prothrombin, ein Vitamin-K-abhängiges Zymogen, das proteolytisch zu Thrombin umgewandelt wird und die zentralen Schritte der Gerinnungskaskade antreibt. Thrombin spaltet Fibrinogen zu Fibrin, verstärkt die Gerinnselbildung durch Aktivierung der Faktoren V, VIII, XI und XIII und signalisiert über proteaseaktivierte Rezeptoren, um die Thrombozytenaktivierung und vaskuläre Entzündungsreaktionen zu koordinieren. Die Produktion und Reifung von Prothrombin hängen von der sekretorischen Prozessierung in der Leber und der γ-Carboxylierung ab, wodurch die Regulation von F2 mit dem Nährstoffstatus und der Qualitätskontrolle des endoplasmatischen Retikulums verknüpft ist. Fehlregulierte F2-Aktivität und genetische Variation werden im Zusammenhang mit Thrombosen und hämostatischen Ungleichgewichten umfassend untersucht und bieten einen mechanistischen Ansatzpunkt, um die Dynamik von Gerinnungswegen in zellulären und in vivo Modellen zu analysieren.

Prothrombin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des F2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von F2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die F2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit F2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.