Plásmido CRISPR de Activación (h) Prickle4: sc-412059-ACT

PRICKLE4 codifica Prickle4, un miembro de la familia Prickle de reguladores de la polaridad celular planar (PCP) que coordinan comportamientos celulares direccionales durante el desarrollo y la organización tisular. Las proteínas Prickle participan en la señalización Wnt/PCP no canónica, influyendo en la dinámica del citoesqueleto, el establecimiento de la polaridad celular y la migración polarizada, con efectos posteriores sobre la morfogénesis y la arquitectura epitelial. La desregulación de los componentes de la PCP puede alterar el movimiento celular y los procesos dependientes de la polaridad, que con frecuencia se asocian a anomalías del desarrollo y a los programas migratorios alterados observados en la biología del cáncer. Por ello, la expresión de PRICKLE4 y la actividad de su vía son de interés para estudios mecanísticos que vinculan la señalización Wnt/PCP con el control de la forma celular, la adhesión y el patrón tisular.

Prickle4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRICKLE4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Prickle4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRICKLE4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRICKLE4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Prickle4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRICKLE4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Prickle4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Prickle4 en células tumorales con expresión de PRICKLE4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.