Plasmide CRISPR d'Activation (h) prefoldin 4: sc-416619-ACT

PFDN4 code la préfoldine 4, une sous-unité du complexe de co-chaperon préfoldine, qui capture les polypeptides naissants ou dépliés et les achemine vers la chaperonine TRiC/CCT afin d’assurer un repliement fonctionnel. Cette activité soutient la protéostasie du cytosquelette en facilitant la maturation de l’actine et de la tubuline, et contribue au maintien de l’homéostasie protéique en conditions de stress cellulaire. Par son rôle dans le repliement médié par les chaperons, PFDN4 participe à des voies qui régulent la progression du cycle cellulaire, les réseaux de protéostasie et la signalisation de la réponse au stress. Un dysfonctionnement des chaperons et une activité altérée du complexe préfoldine ont été associés à un déséquilibre de la protéostasie observé dans des contextes de recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.

prefoldin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PFDN4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

prefoldin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PFDN4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PFDN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de prefoldin 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PFDN4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de prefoldin 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie prefoldin 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de PFDN4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.