PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422387

概要

Ppp3r2は、カルシニューリン（PP2B）の制御性B2サブユニットをコードする。カルシニューリンはCa2+/カルモジュリン依存性のセリン/スレオニンホスファターゼであり、細胞内カルシウムフラックスに応答してシグナルの振幅や基質特異性を調整する。PP2B-B2は、NFATシグナル伝達などの転写出力を制御するCa2+駆動性の脱リン酸化プログラムに加え、シナプス可塑性、細胞骨格の再編成、その他のカルシウム感受性プロセスにも関与する。多様な標的にわたるリン酸化状態を形成することで、PPP3R2は興奮性組織・非興奮性組織の双方における刺激への細胞適応に影響を及ぼす。カルシニューリンシグナルの破綻は、免疫・炎症経路や、カルシウム恒常性の変化に関連する神経学的表現型に関与するとされており、PPP3R2はこれらの過程の機序研究に有用な結節点となる。

PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp3r2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp3r2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp3r2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2B-B2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2B-B2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp3r2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2B-B2の機能に不可欠なPpp3r2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp3r2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2B-B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp3r2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2B-B2 HDRプラスミド（m）および PP2B-B2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp3r2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp3r2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。