Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PP2B-Aβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402853
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP2B-Aβ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP2B-Aβ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP2B-Aβ Antibody (A-11): sc-365612
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP2B-Aβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402853 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PPP3CB codifica la subunità catalitica Aβ della calcineurina (proteina fosfatasi 2B), una fosfatasi serina/treonina dipendente da Ca2+/calmodulina che traduce i segnali intracellulari di calcio in cambiamenti dello stato di fosforilazione. PP2B-Aβ regola substrati chiave come i fattori di trascrizione NFAT, influenzando così programmi di espressione genica responsivi al Ca2+ coinvolti nella segnalazione immunitaria, nell’eccitabilità neuronale e nella plasticità sinaptica. Attraverso un controllo coordinato delle reti di fosfoproteine, l’attività della calcineurina influisce su processi che includono il traffico vescicolare, la dinamica del citoscheletro e le vie di risposta allo stress. Una segnalazione PPP3CB/calcineurina deregolata è stata implicata nella neurobiologia e in meccanismi correlati al sistema immunitario, supportandone l’uso in studi di genomica funzionale incentrati su specifiche vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP3CB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP3CB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP3CB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2B-Aβ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP3CB per lo studio della segnalazione di PP2B-Aβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PPP3CB critici per la funzione di PP2B-Aβ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP3CB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP3CB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP2B-Aβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PP2B-Aβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP3CB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP3CB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.