Plasmide Double Nickase (h) Polycystin-2: sc-400669-NIC

PKD2 code la polycystine‑2, un canal ionique de type TRP perméable au Ca2+ qui se localise aux cils primaires, au réticulum endoplasmique et à d’autres compartiments membranaires afin de réguler la signalisation calcique intracellulaire. La polycystine‑2 coordonne les signaux mécanoperceptifs et chémoperceptifs avec des voies contrôlant la polarité épithéliale, la tubulogenèse et la détection des flux de liquide, et elle interagit fonctionnellement avec la polycystine‑1 au sein des réseaux de signalisation ciliaire. En modulant des programmes transcriptionnels et métaboliques dépendants du calcium, PKD2 influence la progression du cycle cellulaire, la polarité planaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. La dérégulation de PKD2 est fortement associée à la cystogenèse et contribue à la physiopathologie de la polykystose rénale autosomique dominante ainsi qu’à des phénotypes hépatorénaux apparentés.

Polycystin-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PKD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PKD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PKD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PKD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.