POLDIP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413603-ACT

ヒトPOLDIP3（polymerase delta interacting protein 3、DNAポリメラーゼδ相互作用タンパク質3）は、SKARとしても知られ、mRNAのプロセシングと翻訳を結び付け、スプライシングされた転写産物の効率的な発現を支える制御因子です。エキソンジャンクション複合体（EJC）関連シグナル伝達と翻訳出力の連結を含む、RNA代謝およびリボソーム関連過程に関与し、その結果として細胞増殖やストレス応答性遺伝子発現プログラムに影響を与えます。これらの作用を通じて、POLDIP3は増殖やゲノム維持を制御する経路に影響し、がんをはじめとする増殖性疾患やストレス関連疾患で観察される翻訳異常やRNAプロセシング異常の研究において重要な分子です。また、転写および転写後制御との機能的な結び付きにより、ヒト細胞における遺伝子発現制御を解析するための有用な結節点（ノード）としても位置付けられます。

POLDIP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POLDIP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

POLDIP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POLDIP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOLDIP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性POLDIP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOLDIP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPOLDIP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOLDIP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPOLDIP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。