POL H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-401794-KO-2

Panoramica

POLH codifica la DNA polimerasi eta (Pol η), una polimerasi di sintesi translesione della famiglia Y che consente l’aggiramento accurato dei dimeri di pirimidina ciclobutano indotti dai raggi UV durante la replicazione del DNA. Opera nei processi di tolleranza al danno al DNA e nelle risposte allo stress replicativo, coordinandosi con l’antigene nucleare delle cellule in proliferazione (PCNA) e con lo switch, dipendente dall’ubiquitina, dalle polimerasi replicative alle polimerasi TLS specializzate. La perdita o la disfunzione di Pol η compromette la stabilità del genoma e aumenta la mutagenesi indotta dai raggi UV, collegando POLH alla variante dello xeroderma pigmentosum (XP-V) e a più ampi meccanismi di cancerogenesi guidati da difetti nella riparazione del DNA. Poiché POLH si colloca all’intersezione tra l’elaborazione delle lesioni associata alla riparazione per escissione di nucleotidi e l’adattamento del checkpoint della fase S, viene spesso studiato nei percorsi che governano le firme mutazionali e la dinamica delle forcelle di replicazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POL H (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POL H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLH per lo studio della segnalazione di POL H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLH critici per la funzione di POL H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POL H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POL H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POL H Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POL H (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.