PMM2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406428

概要

PMM2は、細胞質に存在する酵素ホスホマンノムターゼ2をコードしており、マンノース-6-リン酸とマンノース-1-リン酸を相互変換してGDP-マンノースの産生およびN結合型糖鎖付加（N-グリコシル化）を支えています。糖鎖前駆体の生合成における役割を通じて、PMM2は複数の細胞種にわたり、タンパク質の折りたたみ、品質管理、分泌、ならびに細胞外マトリックスとの相互作用に影響を及ぼします。PMM2活性の低下は先天性糖鎖異常症（CDG）と関連しており、糖タンパク質の成熟不全によりシグナル伝達、細胞内輸送、器官発生が攪乱されます。細胞ベースのモデルでは、PMM2の機能は、ER恒常性を含む、糖鎖修飾依存的なプロテオスタシスやストレス応答経路を解明する目的で、一般的に解析対象とされています。

PMM2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPMM2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PMM2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PMM2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PMM2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PMM2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PMM2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PMM2の機能に不可欠なPMM2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PMM2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PMM2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPMM2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PMM2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PMM2 HDRプラスミド（h）および PMM2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPMM2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPMM2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。