Partículas Lentivirales de Activación (m2) PKD2: sc-430381-LAC-2

El gen Prkd2 de ratón codifica la proteína quinasa D2 (PKD2), una quinasa de serina/treonina de la familia PKD que transduce señales aguas abajo del diacilglicerol y de isoformas nuevas de PKC para coordinar programas de fosforilación que controlan la expresión génica, el tráfico vesicular, la dinámica del citoesqueleto y la supervivencia celular. La actividad de PKD2 se vincula con frecuencia a la señalización asociada al aparato de Golgi y a membranas, integrando entradas de vías de receptores acoplados a proteína G (GPCR) y de receptores tirosina quinasa para regular respuestas asociadas a MAPK y NF-κB, así como la remodelación celular dependiente de estímulos. La desregulación de la señalización PRKD2/PKD2 se ha asociado con proliferación aberrante, señalización inflamatoria y rasgos metastásicos en biología del cáncer, además de funciones más amplias en procesos relacionados con el estrés y el sistema inmunitario. La edición génica de Prkd2 en modelos murinos respalda estudios mecanísticos de la función del dominio quinasa, el diálogo cruzado entre vías y fenotipos dependientes de la fosforilación mediante proteómica, microscopía en células vivas e investigación in vivo en paradigmas pertinentes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral PKD2 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Prkd2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PKD2 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Prkd2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PKD2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Prkd2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.