PKC lambda/iota Double Nickaseプラスミド (h): sc-402111-NIC

PRKCIは、非典型プロテインキナーゼC（aPKC）アイソフォームであるPKCラムダ／イオタ（PKCι）をコードする。PKCラムダ／イオタはセリン／スレオニンキナーゼで、PAR3およびPAR6とともにPAR極性複合体の中核構成要素として機能する。RhoファミリーGTPアーゼや増殖因子経路からのシグナルを統合し、頂端‐基底極性、タイトジャンクションの形成、不等分裂、方向性移動を制御する。極性や輸送に関わる基質をリン酸化することで、上皮の組織化を形作る細胞骨格の再編成や小胞動態にも影響を与える。PRKCI／PKCラムダ／イオタのシグナル伝達の破綻は、複数の腫瘍コンテキストで極性の異常や浸潤性行動と関連づけられており、がん性シグナルや組織アーキテクチャの機構研究に有用な結節点となっている。

PKC lambda/iota ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRKCI 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRKCI内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRKCIの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRKCIが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。