PITSLRE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419583

概要

マウスCdk11bは、PITSLREセリン/スレオニンキナーゼをコードしており、細胞周期依存性キナーゼ（CDK）ファミリーの一員として、細胞周期の進行と転写およびRNAプロセシングプログラムの協調に関与するとされています。PITSLRE活性は、pre-mRNAスプライシングの制御、有糸分裂の制御、アポトーシスに関連づけられており、増殖細胞におけるプロテオスタシスとゲノム完全性の維持を支えることが示唆されています。PITSLRE関連経路の破綻は、チェックポイント応答やストレスシグナル伝達を変化させ得ます。これらの過程は、増殖制御の破綻や組織恒常性の異常を扱うモデルで頻繁に研究されています。キナーゼシグナル伝達と核内の遺伝子発現機構を結び付ける結節点として、Cdk11bは、マウス系での増殖制御や疾患関連の細胞表現型の機構解析において重要な対象となります。

PITSLRE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCdk11b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cdk11b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cdk11bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PITSLREタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PITSLREシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cdk11b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PITSLREの機能に不可欠なCdk11bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cdk11bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PITSLRE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPITSLRE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cdk11b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PITSLRE HDRプラスミド（m）および PITSLRE HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCdk11bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCdk11b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。