PiT1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-422988-LAC

Mouse Slc20a1 kodiert PiT1 (SLC20A1), einen natriumabhängigen Symporter für anorganisches Phosphat (Pi), der die zelluläre Phosphataufnahme unterstützt, die für die Nukleotidbiosynthese, den Turnover von Membranphospholipiden und die bioenergetische Homöostase erforderlich ist. PiT1 trägt zur Phosphat-Sensorik und zu nährstoffresponsiver Signalgebung bei und greift dabei in Programme der Stoffwechsel- und Zellzykluskontrolle ein, die Proliferation und Überleben beeinflussen. In der Entwicklung und bei der Erhaltung adulten Gewebes ist die PiT1-Aktivität mit Differenzierungszuständen und der Verfügbarkeit von extrazellulärem Phosphat verknüpft – Prozesse, die für Studien zur Mineralionen-Handhabung, Gewebeumbau und metabolischem Stress relevant sind. Veränderte Phosphattransportprozesse und PiT1-assoziierte Signalwege wurden in Kontexten wie der Biologie der skelettalen und vaskulären Kalzifizierung, dem Tumorzellstoffwechsel und entzündlichen Mikroumgebungen untersucht und unterstützen mechanistische Forschung zu phosphatabhängigen Phänotypen.

PiT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Slc20a1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PiT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Slc20a1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PiT1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Slc20a1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.