PIPK I β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403758-ACT

PIP5K1B codifica a fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinase tipo I beta (PIPK I β), uma quinase lipídica que gera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) nas membranas celulares. O PI(4,5)P2 é um lipídio sinalizador central que regula a remodelação do citoesqueleto de actina, a dinâmica das adesões focais, o tráfego vesicular e a transdução de sinal dependente de fosfoinositídeos por vias como PLC/IP3-DAG e PI3K-AKT. Por meio desses processos, a PIPK I β contribui para a migração celular, a endocitose e a organização de membrana, conectando a homeostase de fosfoinositídeos a alterações dependentes do contexto na proliferação e na função de células imunes. A desregulação da sinalização por fosfoinositídeos e do controle do citoesqueleto é uma característica recorrente na biologia do câncer, em estados inflamatórios e na neurobiologia, tornando o PIP5K1B um nó útil para estudos mecanísticos de sinalização próxima à membrana.

PIPK I β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIP5K1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIPK I β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIP5K1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIP5K1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIPK I β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIP5K1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIPK I β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIPK I β em células tumorais com expressão de PIP5K1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.