PIMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407101

概要

ヒトTGS1はトリメチルグアノシン合成酵素1（PIMT）をコードしており、SAM依存性メチルトランスフェラーゼとして、snRNAやその他の小核RNAに存在する2,2,7-トリメチルグアノシン（TMG）キャップを形成します。この修飾はsnRNPの成熟、核内移行、スプライソソーム機能を支え、TGS1活性をpre-mRNAスプライシングの忠実性およびより広範なRNAプロセシングネットワークと結び付けます。TGS1はまた、プロテオスタシスやストレス応答に影響するRNA品質管理やリボ核タンパク質生合成経路とも連携します。RNA代謝やスプライシング関連プログラムの制御異常は、神経変性、がん生物学、発生表現型に関連する機序においてTGS1/PIMTの関与を示唆しており、経路に焦点を当てた研究に有用な結節点となります。

PIMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTGS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TGS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TGS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PIMTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PIMTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TGS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PIMTの機能に不可欠なTGS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TGS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PIMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPIMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TGS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PIMT HDRプラスミド（h）および PIMT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTGS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTGS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。