Plásmido Doble Nickase (m) Pim-1: sc-422237-NIC

El gen **Pim1** de ratón codifica la quinasa serina/treonina **Pim-1**, una enzima de señalización constitutivamente activa que modula la supervivencia celular, la proliferación y la adaptación metabólica. Pim-1 fosforila sustratos implicados en el control del ciclo celular y la apoptosis, incluidos reguladores de la traducción y de las respuestas al estrés, y coopera con la señalización de factores de crecimiento y citocinas para moldear la función de células hematopoyéticas e inmunitarias. Como efector downstream frecuentemente vinculado a programas transcripcionales oncogénicos, Pim-1 se estudia en vías que convergen en la actividad de MYC, la síntesis proteica dependiente de mTOR y la resistencia al estrés celular. La actividad desregulada de Pim1/Pim-1 se ha asociado con la transformación maligna y la progresión tumoral en múltiples sistemas modelo, lo que lo convierte en un objetivo común para estudios mecanísticos de la señalización por quinasas y la oncogénesis.

Pim-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pim1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pim1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pim1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pim1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.