Plasmide Double Nickase (h) Pilt: sc-413980-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Pilt correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pilt Double Nickase (h) et le plasmide Pilt Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TJAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Pilt | sc-413980-NIC | 20 µg | $410.00 |
TJAP1 code pour la protéine humaine Pilt, un facteur encore mal caractérisé, dont on prédit qu’il influence l’organisation des jonctions et la polarité épithéliale via des interactions avec des complexes associés au cytosquelette et à la membrane. Des annotations récentes relient TJAP1 à des processus pertinents pour la dynamique de l’adhésion cellule–cellule, la fonction de barrière et le contrôle spatial de la signalisation, qui dépendent d’un trafic coordonné et du remodelage de l’actine. La dérégulation de l’architecture jonctionnelle et des programmes de polarité est fréquemment associée à des altérations de la prolifération, de la migration et des réponses au stress, ce qui fait de TJAP1 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles d’homéostasie tissulaire. L’étude de la fonction de Pilt peut aider à préciser comment les réseaux liés aux jonctions s’articulent avec les voies qui régissent la différenciation et une signalisation dépendante du contexte dans les cellules humaines.
Pilt Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TJAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TJAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TJAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TJAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.