PIDD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403439-ACT

PIDD1 codifica a proteína de domínio de morte induzida por p53 (PIDD), um adaptador citosólico que integra sinais de dano genotóxico e de estresse celular em redes de sinalização apoptótica e inflamatória. O PIDD participa da montagem de complexos multiproteicos, como o PIDDossomo, influenciando a ativação da caspase-2, as respostas a dano no DNA e decisões de destino celular, incluindo apoptose e controle de checkpoints do ciclo celular. Por meio de interações proteicas mediadas por seu domínio de morte, o PIDD pode modular vias relacionadas ao NF-κB e programas transcricionais responsivos ao estresse. A desregulação da sinalização PIDD1/PIDD tem sido investigada no contexto de alterações na sensibilidade à apoptose e de fenótipos de instabilidade genômica relevantes para a biologia do câncer e outros distúrbios da sinalização de estresse.

PIDD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIDD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIDD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIDD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIDD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIDD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIDD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIDD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIDD em células tumorais com expressão de PIDD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.