Plásmido Doble Nickase (h) pICln: sc-405798-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)pICln consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa pICln (h) y el plásmido de doble nickasa pICln (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CLNS1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: pICln Anticuerpo (G-1): sc-271327
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) pICln | sc-405798-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) pICln | sc-405798-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLNS1A codifica pICln, una proteína conservada de unión a ARN que actúa como chaperona de ensamblaje para ribonucleoproteínas de la clase Sm, apoyando la biogénesis de las snRNP del espliceosoma y de otros complejos RNP. Mediante interacciones con componentes del metilosoma que contienen PRMT5 y con proteínas Sm, pICln ayuda a coordinar la metilación de arginina y el ensamblaje ordenado de RNP, vinculándose así al control del empalme (splicing) del ARN y a una regulación más amplia de la expresión génica. La alteración de la función de CLNS1A/pICln se ha asociado con defectos en la maduración de las snRNP, desregulación del transcriptoma y fenotipos de estrés celular relevantes para estudios mecanísticos de procesos patológicos relacionados con el splicing.
pICln El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLNS1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLNS1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLNS1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLNS1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.