PI-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423120-ACT

O Serpinb9 murino codifica a PI-9, um inibidor intracelular de serinoproteases que restringe a atividade da granzima B para modular a função efetora de linfócitos citotóxicos e prevenir a apoptose induzida por proteases em células apresentadoras de antígeno e em células imunologicamente privilegiadas. Ao amortecer eventos de clivagem mediados pela granzima B, a PI-9 contribui para a regulação da ativação de caspases, para a sobrevivência de células inflamatórias e para a homeostase imune durante interações citotóxicas célula a célula. A expressão de Serpinb9 está associada a mecanismos de evasão imune e de persistência em microambientes inflamatórios, o que a torna relevante para estudos de imunobiologia tumoral, autoimunidade e biologia de transplantes. Sua regulação induzível também se conecta a programas transcricionais responsivos a estresse e citocinas, que moldam a diferenciação de células imunes e a tolerância imune específica de tecidos.

PI-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Serpinb9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Serpinb9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Serpinb9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Serpinb9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI-9 em células tumorais com expressão de Serpinb9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.