Particules Lentivirales d'Activation (h) PI 3-kinase p55γ: sc-402964-LAC

PIK3R3 code la sous-unité régulatrice p55γ de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) de classe IA, qui couple les récepteurs tyrosine kinases activés et les protéines adaptatrices aux isoformes catalytiques p110. En modulant la production de PI(3,4,5)P3, la signalisation PI3K coordonne l’activité de la voie AKT–mTOR, influençant la croissance cellulaire, la survie, le métabolisme et la dynamique du cytosquelette. Une régulation altérée des composants de la voie PI3K est fréquemment associée à une signalisation oncogénique, à une prolifération aberrante et à une résistance au stress cellulaire, faisant de PIK3R3 un nœud pertinent pour l’analyse de cette voie. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, les sorties de signalisation PI3K dépendantes de p55γ peuvent également moduler la motilité et les interactions entre voies, avec des répercussions sur les programmes inflammatoires et ceux liés au microenvironnement tumoral.

Les particules d'activation lentivirales PI 3-kinase p55γ (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PIK3R3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PI 3-kinase p55γ (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PIK3R3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PI 3-kinase p55γ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PIK3R3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.