CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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PI 3-kinase p110β Double Nickaseプラスミド (m): sc-428980-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PI 3-kinase p110β Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PI 3-kinase p110βダブルニカースプラスミド（m）およびPI 3-kinase p110βダブルニカースプラスミド（m2）は、Pik3cbを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PI 3-kinase p110β 抗体 (C-8): sc-376641
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PI 3-kinase p110β Double Nickaseプラスミド (m) | sc-428980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p110β Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-428980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pik3cbは、クラスIAホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）の触媒サブユニットであるp110βをコードしており、PIP2をリン酸化してPIP3を生成し、PI3K–AKTシグナル伝達を増幅・伝播させる脂質キナーゼである。マウス細胞では、p110βは増殖因子受容体およびGPCR（Gタンパク質共役型受容体）に連結したシグナル伝達に関与し、細胞生存、増殖、代謝、小胞輸送、細胞骨格ダイナミクスといった下流過程を統合的に制御する。さらに、制御サブユニットであるp85と協調して働き、経路のシグナル強度や空間的なシグナル伝達を調節する。p110β活性の変化を含むPI3K経路構成要素の機能異常は、異常な細胞増殖、代謝表現型、免疫関連シグナルの欠陥などの文脈で広く研究されている。
PI 3-kinase p110β ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pik3cb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pik3cb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pik3cbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pik3cbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。