PHT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425761

Visão geral

O gene **Slc15a3** codifica o transportador de histidina/dipeptídeos acoplado a prótons **PHT2**, um membro da família **SLC15** implicado no transporte de solutos em endolisossomos e no processamento intracelular de peptídeos. Ao acoplar o transporte de peptídeos a gradientes de prótons, o PHT2 contribui para a homeostase lisossomal, o sensoriamento de nutrientes e a comunicação entre o tráfego vesicular e programas metabólicos em células mieloides e outros tipos celulares relevantes para o sistema imune. Alterações na atividade da família SLC15 têm sido associadas à desregulação da sinalização imune inata e a estados inflamatórios, tornando o **Slc15a3** um ponto útil para estudar como o transporte endossomal/lisossomal influencia respostas de citocinas e vias associadas ao processamento de antígenos. Em sistemas murinos, a perturbação de **Slc15a3** permite investigar mecanisticamente processos dependentes do pH vesicular que moldam a ativação imune e modelos de inflamação tecidual.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PHT2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc15a3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc15a3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc15a3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PHT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc15a3 para a investigação da sinalização de PHT2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc15a3 críticos para a função PHT2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc15a3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PHT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PHT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc15a3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PHT2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PHT2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc15a3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc15a3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.