PHT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425761

概要

Slc15a3は、プロトン共役型ヒスチジン／ジペプチドトランスポーターPHT2をコードしており、これはエンドリソソームにおける溶質輸送や細胞内ペプチドの取り扱いに関与するとされるSLC15ファミリーの一員である。ペプチド輸送をプロトン勾配に共役させることで、PHT2はリソソームの恒常性、栄養センシング、ならびに骨髄系細胞など免疫関連細胞種における小胞輸送と代謝プログラム間のクロストークに寄与する。SLC15ファミリーの活性変化は、自然免疫シグナルの破綻や炎症状態と関連づけられており、そのためSlc15a3は、エンドソーム／リソソーム輸送がサイトカイン応答や抗原プロセシング関連経路にどのように影響するかを調べるうえで有用な結節点となる。マウス系では、Slc15a3の改変により、免疫活性化や組織炎症モデルを形作る小胞pH依存性プロセスの機構的検討が可能となる。

PHT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc15a3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc15a3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc15a3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PHT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PHT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc15a3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PHT2の機能に不可欠なSlc15a3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc15a3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PHT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPHT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc15a3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PHT2 HDRプラスミド（m）および PHT2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc15a3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc15a3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。