Plasmide Double Nickase (m) PHLPPL: sc-434083-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PHLPPL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PHLPPL Double Nickase (m) et le plasmide PHLPPL Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Phlpp2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) PHLPPL | sc-434083-NIC | 20 µg | $410.00 |
Phlpp2 code PHLPPL, une phosphatase protéique Ser/Thr qui déphosphoryle des nœuds clés de signalisation, notamment AKT, modulant ainsi l’amplitude de la voie PI3K–AKT, la survie cellulaire et l’homéostasie métabolique dans des cellules de souris. En contrebalançant la phosphorylation induite par les kinases, PHLPPL influence la prolifération, les réponses au stress et les sorties de signalisation liées à l’insuline, et peut façonner les programmes transcriptionnels en aval régulés par mTOR et FOXO. Une activité altérée des membres de la famille PHLPP est associée à une croissance dérégulée et à des phénotypes métaboliques dans des modèles expérimentaux, faisant de Phlpp2 une cible utile pour étudier le recâblage des voies de signalisation dans des contextes de stress oncogénique ou métabolique.
PHLPPL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Phlpp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Phlpp2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Phlpp2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Phlpp2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.