Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Perilipin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401305
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Perilipin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Perilipin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Perilipin Antibody (G-2): sc-390169
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Perilipin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401305 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PLIN1 codifica la perilipina-1, una fosfoproteina associata alle goccioline lipidiche che regola l’immagazzinamento dei trigliceridi e la lipolisi negli adipociti controllando l’accesso delle lipasi alla superficie della gocciolina. La perilipina integra eventi di fosforilazione dipendenti da cAMP/PKA con la mobilizzazione dei lipidi nel tessuto adiposo, coordinando le interazioni con cofattori come ABHD5/CGI-58 ed enzimi tra cui ATGL e HSL. Attraverso il suo ruolo nella biogenesi e nel turnover delle goccioline lipidiche, PLIN1 influenza l’omeostasi energetica cellulare, il flusso degli acidi grassi e la segnalazione metabolica mediata dalle adipokine. Alterazioni genetiche e funzionali di PLIN1 sono state associate a disfunzioni del tessuto adiposo umano, inclusi fenotipi di lipodistrofia e disregolazione metabolica, rendendolo un bersaglio utile per studiare la gestione dei lipidi in modelli cellulari pertinenti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Perilipin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLIN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLIN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLIN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Perilipin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLIN1 per lo studio della segnalazione di Perilipin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PLIN1 critici per la funzione di Perilipin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLIN1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Perilipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Perilipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLIN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Perilipin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Perilipin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLIN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLIN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.