PEPT1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401259-NIC

SLC15A1 codifica o PEPT1, um transportador de oligopéptidos acoplado a protões que medeia a captação de di- e tripéptidos e de xenobióticos semelhantes a péptidos através da membrana apical de células epiteliais, particularmente no intestino delgado. O PEPT1 sustenta a absorção de nutrientes e a homeostase celular do azoto ao acoplar o transporte do substrato ao gradiente transmembranar de H+, integrando-se com a utilização de aminoácidos e com programas metabólicos epiteliais. A sua atividade influencia a fisiologia da barreira intestinal e a diferenciação epitelial, e foram descritas alterações na expressão de SLC15A1 em contextos inflamatórios e metabólicos que afetam a gestão de nutrientes regulada por transportadores. Como o PEPT1 também transporta compostos peptidomiméticos, o SLC15A1 serve como modelo para estudar a regulação de transportadores da família SLC, a cinética do transporte através de membranas e as respostas epiteliais ao stress.

PEPT1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SLC15A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SLC15A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SLC15A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SLC15A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.