Plásmido Doble Nickase (h) PEPCK-M/PCK2: sc-400725-NIC

El gen humano PCK2 codifica la isoforma mitocondrial de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK-M), una enzima gluconeogénica y anaplerótica clave que convierte el oxaloacetato en fosfoenolpiruvato, conectando los intermediarios del ciclo del TCA con las vías biosintéticas citosólicas. Al modular el flujo de carbono entre los compartimentos mitocondrial y citosólico, PCK2 influye en el metabolismo de la glucosa y los lípidos, el equilibrio redox y la utilización de aminoácidos bajo estrés nutricional. La actividad de PCK2 se cruza con vías que regulan la adaptación metabólica, incluidas la gluconeogénesis, la cataplerosis y las redes de serina/glicina y gliceroneogénesis. La expresión o función desregulada de PCK2 se ha asociado con estados metabólicos alterados observados en el metabolismo del cáncer, la resistencia a la insulina y otros trastornos caracterizados por perturbaciones de la homeostasis mitocondrial y de la glucosa.

PEPCK-M/PCK2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PCK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PCK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PCK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PCK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.