Particules Lentivirales d'Activation (m) Peg10: sc-431278-LAC

Peg10 (paternally expressed gene 10) chez la souris code une protéine de type Gag/Pol, dérivée d’un rétrotransposon domestiqué, soumise à empreinte génomique et indispensable au développement placentaire ainsi qu’à la différenciation du trophoblaste. PEG10 participe à des réseaux de liaison à l’ARN et d’interactions protéine–protéine qui influencent la survie cellulaire, la prolifération et les programmes de lignée, et a été associé à des voies régulant la transition épithélio-mésenchymateuse, le turnover médié par l’ubiquitine et des processus liés à l’autophagie. Une expression dérégulée de PEG10 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et lors d’états de remodelage tissulaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le contrôle de la croissance et les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Dans des modèles murins, Peg10 est fréquemment étudié pour ses rôles dans la régulation génique du développement, la biologie de l’empreinte et les dépendances de signalisation oncogénique.

Les particules d'activation lentivirales Peg10 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Peg10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Peg10 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Peg10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Peg10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Peg10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.