PDLIM5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405340

Descripción general

PDLIM5 codifica una proteína andamiaje con dominios PDZ-LIM que se localiza en estructuras ricas en actina y conecta la arquitectura del citoesqueleto con complejos de señalización en las adhesiones focales y a lo largo de las fibras de estrés. Mediante interacciones con quinasas y socios asociados a la actina, PDLIM5 contribuye a la mecanotransducción, la adhesión y migración celular, y la organización de elementos contráctiles que influyen en la morfología celular y la transmisión de fuerza. En tejidos excitables, PDLIM5 se ha vinculado a la regulación de la señalización del citoesqueleto en neuronas y corazón, así como a la remodelación sináptica o contráctil. Se han reportado alteraciones en la expresión de PDLIM5 o variación genética en estudios de fenotipos neuropsiquiátricos y patología cardíaca, lo que respalda su relevancia para investigar redes de señalización acopladas al citoesqueleto en modelos pertinentes para enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDLIM5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDLIM5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDLIM5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDLIM5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDLIM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDLIM5 para la investigación de la señalización de PDLIM5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDLIM5 críticos para la función de PDLIM5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDLIM5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PDLIM5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDLIM5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDLIM5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDLIM5 (h) y el plásmido HDR PDLIM5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDLIM5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDLIM5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.