PDI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422099

Panoramica

P4hb codifica la proteina disolfuro isomerasi (PDI), un’abbondante ossidoreduttasi del reticolo endoplasmatico (RE) che catalizza la formazione, la riduzione e l’isomerizzazione dei ponti disolfuro, supportando il ripiegamento e la maturazione delle proteine secretorie e di membrana. La PDI opera nelle reti di proteostasi del RE, in collaborazione con chaperoni e ossidoreduttasi, per regolare il ripiegamento ossidativo delle proteine e il controllo qualità, e contribuisce anche alla segnalazione dello stress del RE e alle vie della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). Attraverso l’attività di scambio tiolo-disolfuro e le interazioni con substrati mal ripiegati, la PDI influenza l’omeostasi redox, il traffico proteico e le decisioni di sopravvivenza cellulare in condizioni di stress proteotossico. Un’attività disfunzionale di P4hb/PDI è stata associata a stati patologici caratterizzati da stress cronico del RE e da un equilibrio redox alterato, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in modelli di neurodegenerazione, disfunzione metabolica e biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDI (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P4hb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P4hb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P4hb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDI.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P4hb per lo studio della segnalazione di PDI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P4hb critici per la funzione di PDI
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P4hb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PDI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P4hb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDI Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PDI (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P4hb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P4hb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.