PCYT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416514

概要

PCYT2は、ホスファチジルエタノールアミン（PE）生合成のためのCDP-エタノールアミンを産生するケネディ経路における律速酵素、CTP:ホスホエタノールアミン・シチジリルトランスフェラーゼをコードしています。PEの利用可能量を制御することで、PCYT2は膜の新生、小胞体（ER）およびミトコンドリア膜の組成、脂肪滴の動態、ならびにオートファジー関連の膜リモデリングに影響を及ぼします。PCYT2依存的なリン脂質恒常性は、膜脂質組成の変化に応答する細胞のエネルギーバランスやストレスシグナル伝達経路とも交差しています。PCYT2の遺伝学的破綻や活性低下は、遺伝性の神経筋および神経発達の表現型と関連づけられており、ヒト細胞における脂質代謝関連疾患メカニズムのモデル化における重要性を裏づけています。

PCYT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCYT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCYT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCYT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PCYT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PCYT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCYT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PCYT2の機能に不可欠なPCYT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCYT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PCYT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPCYT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCYT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PCYT2 HDRプラスミド（h）および PCYT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCYT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCYT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。