Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PCB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401254
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PCB Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PCB, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PCB Antibody (D-9): sc-365673
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PCB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401254 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene PC umano (piruvato carbossilasi) codifica un enzima mitocondriale biotina-dipendente che catalizza la carbossilazione del piruvato a ossalacetato, un processo guidato dall’ATP, reintegrando gli intermedi del ciclo degli acidi tricarbossilici (TCA) e sostenendo l’anaplerosi. L’attività della PC collega il metabolismo centrale del carbonio alla gluconeogenesi, alla lipogenesi e alla biosintesi degli amminoacidi, influenzando l’equilibrio redox mitocondriale e l’omeostasi energetica cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione della PC sono state associate a errori congeniti del metabolismo e alla riprogrammazione metabolica osservata in diversi contesti patologici, inclusi il cancro e le malattie del fegato, in cui il flusso anaplerotico può influenzare la proliferazione e le risposte allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCB.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PC per lo studio della segnalazione di PCB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PC critici per la funzione di PCB
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PC per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PCB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PCB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.