paxillin Plasmide Double Nickase (h): sc-416733-NIC

PXN codifica la paxillina, un adattatore multi-dominio delle adesioni focali che coordina la segnalazione delle integrine con il rimodellamento del citoscheletro di actina, fungendo da impalcatura per chinasi e regolatori di GTPasi nei siti di contatto cellula–matrice. Attraverso interazioni con FAK/PTK2, le chinasi della famiglia SRC, CRK e componenti delle vie ARF/RHO, la paxillina contribuisce a regolare il turnover delle adesioni, lo spreading cellulare, la migrazione e la meccanotrasduzione. PXN partecipa a vie che collegano i segnali della matrice extracellulare agli output di MAPK e PI3K, che influenzano programmi di proliferazione e sopravvivenza. Alterazioni dell’espressione, della fosforilazione o della dinamica delle adesioni focali della paxillina sono state associate a comportamento invasivo e potenziale metastatico in molteplici contesti tumorali, favorendone l’impiego in modelli di motilità cellulare e segnalazione dipendente dall’adesione.

paxillin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PXN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PXN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PXN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PXN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.