Pax-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422114

Visão geral

O gene Pax1 do camundongo codifica o fator de transcrição Pax-1 da família paired box, uma proteína nuclear ligante de DNA que regula a especificação de linhagens celulares e o estabelecimento de padrões durante a embriogênese, particularmente no mesoderma paraxial e na coluna vertebral em desenvolvimento. Pax-1 integra sinais do desenvolvimento para controlar programas transcricionais envolvidos na condrogênese, na diferenciação do esclerótomo e na organização segmentar do esqueleto axial. Alterações na função de Pax1 têm sido associadas a malformações vertebrais e esqueléticas congênitas e o gene é utilizado como marcador e regulador em estudos sobre a formação da coluna e o desenvolvimento musculoesquelético. Em modelos celulares, a atividade de Pax-1 é investigada quanto aos seus efeitos sobre redes transcricionais que governam proliferação e diferenciação em contextos de progenitores mesenquimais e de cartilagem.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Pax-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pax1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pax1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pax1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Pax-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pax1 para a investigação da sinalização de Pax-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pax1 críticos para a função Pax-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pax1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Pax-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Pax-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pax1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Pax-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Pax-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pax1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pax1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.