PAWP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406196

概要

WBP2NL は、受精時の卵母細胞活性化に寄与する精子由来因子である PAWP（postacrosomal WW domain-binding protein）をコードする。PAWP は、精子の後先体鞘（postacrosomal sheath）に豊富に存在する。PAWP には PPXY モチーフが含まれており、WW ドメインを有するシグナル伝達アダプターと結合することで、初期胚におけるカルシウムオシレーションや細胞周期再開に関与するとされる、リン酸化依存的な制御ネットワークとの関連が示されている。機能解析研究では、PAWP の発現量や活性の変化が、受精不全、胚発生異常、ならびに一部の男性因子不妊と関連することが報告されている。生殖細胞特異的な制御因子として、WBP2NL は精子—卵子間シグナル伝達、配偶子の品質管理、そして生殖関連経路間のクロストークを解明するための扱いやすいモデルとなる。

PAWP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWBP2NL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WBP2NL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WBP2NLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAWPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAWPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WBP2NL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAWPの機能に不可欠なWBP2NLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WBP2NLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAWP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAWP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WBP2NL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAWP HDRプラスミド（h）および PAWP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWBP2NLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWBP2NL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。