patched 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404866

Visão geral

O PTCH2 codifica o patched 2, um recetor transmembranar com doze passagens que atua como um regulador negativo fundamental da sinalização Hedgehog, ao ligar-se a ligandos Hedgehog e modular a atividade da Smoothened. Ao controlar a transcrição dependente de GLI, o PTCH2 contribui para a padronização do desenvolvimento, decisões de destino celular e homeostase tecidular, e a sua atividade cruza-se com processos como proliferação, diferenciação e ciliogénese. A sinalização desregulada da via Hedgehog e alterações na função do PTCH2 têm sido associadas a contextos de sinalização oncogénica e a fenótipos congénitos ou do desenvolvimento, apoiando a sua relevância para estudos mecanísticos centrados na via. O PTCH2 também é investigado em relação ao tráfego do recetor e à regulação por feedback que ajusta a amplitude e a duração do sinal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO patched 2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PTCH2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PTCH2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PTCH2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína patched 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PTCH2 para a investigação da sinalização de patched 2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PTCH2 críticos para a função patched 2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PTCH2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo patched 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo patched 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PTCH2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo patched 2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR patched 2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PTCH2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PTCH2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.