patched 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404866

Panoramica

PTCH2 codifica per patched 2, un recettore transmembrana a dodici passaggi che funge da principale regolatore negativo della segnalazione Hedgehog legando i ligandi Hedgehog e modulando l’attività di Smoothened. Attraverso il controllo della trascrizione dipendente da GLI, PTCH2 contribuisce alla definizione dei pattern di sviluppo, alle decisioni sul destino cellulare e all’omeostasi dei tessuti; inoltre, la sua attività si interseca con processi quali proliferazione, differenziamento e ciliogenesi. La deregolazione della via Hedgehog e l’alterazione della funzione di PTCH2 sono state associate a contesti di segnalazione oncogenica e a fenotipi congeniti o dello sviluppo, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici incentrati sulla via. PTCH2 è anche oggetto di studio in relazione al traffico recettoriale e alla regolazione a feedback che modulano ampiezza e durata del segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO patched 2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTCH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTCH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTCH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina patched 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTCH2 per lo studio della segnalazione di patched 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTCH2 critici per la funzione di patched 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTCH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal patched 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal patched 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTCH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal patched 2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR patched 2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTCH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTCH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.