PARP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419018-ACT

O Parp1 de camundongo codifica a poli(ADP-ribose) polimerase 1 (PARP1), um sensor nuclear de danos ao DNA que catalisa a poli(ADP-ribosil)ação de proteínas-alvo usando NAD+ para coordenar o remodelamento da cromatina e o recrutamento de fatores de reparo do DNA. A PARP1 é central no reparo por excisão de bases e participa amplamente da resposta a danos no DNA por meio de interações com a sinalização de estresse replicativo, a regulação transcricional e a manutenção da estabilidade genômica. Além do reparo, a atividade da PARP1 influencia programas gênicos inflamatórios e decisões de destino celular por meio da modulação da acessibilidade da cromatina e do turnover de proteínas. A sinalização desregulada de PARP1 e as dinâmicas alteradas de PARilação são frequentemente estudadas em biologia do câncer, neurodegeneração e patologias associadas ao sistema imune, nas quais o acúmulo de danos ao DNA e as respostas ao estresse moldam fenótipos relevantes para a doença.

PARP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Parp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PARP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Parp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Parp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PARP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Parp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PARP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PARP1 em células tumorais com expressão de Parp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.