Paraplegin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406299

Visão geral

SPG7 codifica a paraplegina, uma metaloprotease dependente de ATP da membrana interna mitocondrial, integrante do complexo protease m-AAA, que sustenta o controle de qualidade proteica, o processamento proteolítico e a degradação de substratos mal dobrados associados à membrana e à matriz. A paraplegina contribui para a proteostase mitocondrial, a manutenção da cadeia respiratória e respostas homeostáticas ao estresse oxidativo e proteotóxico por meio da vigilância coordenada da composição proteica da membrana interna. A disfunção de SPG7 compromete a função mitocondrial e está associada a fenótipos neurodegenerativos, incluindo a paraplegia espástica hereditária, o que a torna um alvo útil para estudar a vulnerabilidade axonal e a manutenção neuronal dependente de energia. Modelos focados em SPG7 também elucidam vias envolvidas na dinâmica mitocondrial, nas respostas a proteínas mal dobradas e na sinalização adaptativa ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Paraplegin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPG7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPG7, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPG7 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Paraplegin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPG7 para a investigação da sinalização de Paraplegin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPG7 críticos para a função Paraplegin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPG7 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Paraplegin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Paraplegin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPG7. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Paraplegin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Paraplegin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPG7 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPG7 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.