Papilin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406332

Panoramica

PAPLN codifica la papilina, una grande glicoproteina associata alla matrice extracellulare, caratterizzata da molteplici domini modulari di interazione che supportano l’organizzazione della matrice e l’architettura della membrana basale. La papilina è implicata nella regolazione delle proteasi extracellulari e nel rimodellamento della matrice, processi che influenzano adesione e migrazione cellulare, nonché la morfogenesi dei tessuti. Attraverso queste funzioni dirette alla matrice, PAPLN è rilevante per vie che collegano la dinamica della matrice extracellulare a programmi di rimodellamento dello sviluppo e patologici, inclusi contesti in cui proteolisi alterata e organizzazione stromale contribuiscono alla biologia della malattia. Lo studio di PAPLN supporta ricerche meccanicistiche sull’omeostasi della matrice extracellulare e sulle interfacce di segnalazione tra cellula e matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Papilin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAPLN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAPLN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAPLN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Papilin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAPLN per lo studio della segnalazione di Papilin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAPLN critici per la funzione di Papilin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAPLN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Papilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Papilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAPLN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Papilin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Papilin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAPLN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAPLN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.