Partículas Lentivirales de Activación (h2) PACE4: sc-405605-LAC-2

El gen humano PCSK6 codifica la proproteína convertasa PACE4, una serina endoproteasa dependiente de calcio que procesa proteínas precursoras secretadas y de la superficie celular en motivos de residuos básicos para generar factores maduros y bioactivos. PACE4 contribuye a la activación posraduccional de factores de crecimiento, metaloproteinasas, receptores y proteínas relacionadas con la adhesión, vinculando la actividad de PCSK6 con la remodelación de la matriz extracelular, la migración celular y redes de señalización del desarrollo, incluidas las vías asociadas a TGF-β/BMP. La expresión o actividad desregulada de PCSK6 se ha asociado con un procesamiento proteolítico aberrante en la biología del cáncer, la remodelación tisular vinculada a la fibrosis y fenotipos cardiovasculares, lo que refleja su papel en la regulación de la señalización paracrina y de las cascadas de proteasas. Por ello, la perturbación de PCSK6/PACE4 se utiliza en estudios de edición génica y genómica funcional para investigar la maduración de sustratos dependiente de convertasas, la proteostasis de la vía secretora y los cambios posteriores en la invasión, la diferenciación y las salidas de señalización inflamatoria.

Las partículas de activación lentiviral PACE4 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PCSK6 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PACE4 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PCSK6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PACE4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PCSK6 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.