Plásmido CRISPR de Activación (h) PABPN1: sc-403802-ACT

La PABPN1 humana (proteína nuclear 1 de unión a poli(A)) es una proteína nuclear de unión a ARN expresada de forma ubicua que se asocia con la cola poli(A) para regular el procesamiento del extremo 3′ del ARNm, la poliadenilación y la estabilidad de los transcritos. Al influir en el control de la longitud de la cola poli(A) y en la maduración del ARN, PABPN1 contribuye a programas globales de expresión génica y al metabolismo del ARN dentro del núcleo. La desregulación o las mutaciones de PABPN1 alteran el procesamiento del ARN y las vías de proteostasis, y se asocian con patología del músculo esquelético, en particular con la distrofia muscular oculofaríngea (OPMD). Como componente central de la regulación postranscripcional, PABPN1 se estudia ampliamente en los mecanismos de control de calidad del ARN, el recambio nuclear de ARN y los cambios en el procesamiento del ARNm asociados al estrés.

PABPN1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PABPN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PABPN1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PABPN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PABPN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PABPN1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PABPN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PABPN1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PABPN1 en células tumorales con expresión de PABPN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.