p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400444

概要

CDKN1Cは、CIP/KIPファミリーに属するサイクリン依存性キナーゼ（CDK）阻害因子であるp57 Kip2をコードしており、CDK活性を抑制してG1期の細胞周期停止を誘導し、終末分化を支えます。p57 Kip2は、サイクリン–CDK複合体の制御と、増殖を系譜決定と協調させるチェックポイントとの連携を通じて、発生および増殖制御のシグナルを統合します。この遺伝子はインプリンティングを受け、用量感受性であるため、胚発生、胎盤生物学、ならびに組織恒常性においてその発現は厳密に制御されています。CDKN1Cの制御破綻は、インプリンティング関連の成長異常と関連し、細胞周期制御や分化の変化が疾患関連表現型に寄与する状況で研究されています。

p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDKN1C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDKN1C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDKN1Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p57 Kip2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p57 Kip2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDKN1C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p57 Kip2の機能に不可欠なCDKN1Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDKN1Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp57 Kip2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDKN1C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p57 Kip2 HDRプラスミド（h）および p57 Kip2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDKN1Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDKN1C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。