p57 Kip2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400444

Descripción general

CDKN1C codifica p57 Kip2, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina (CDK) de la familia CIP/KIP que restringe la actividad de las CDK para imponer una detención del ciclo celular en G1 y favorecer la diferenciación terminal. p57 Kip2 integra señales del desarrollo y del control del crecimiento mediante la regulación de los complejos ciclina–CDK y su conexión con puntos de control que coordinan la proliferación con la especificación de linaje. El gen está sometido a impronta genómica y es sensible a la dosis, por lo que su expresión se regula de forma estricta durante la embriogénesis, en la biología placentaria y en la homeostasis tisular. La desregulación de CDKN1C se asocia con trastornos del crecimiento relacionados con la impronta y se ha investigado en contextos en los que un control alterado del ciclo celular y de la diferenciación contribuye a fenotipos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO p57 Kip2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDKN1C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDKN1C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDKN1C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p57 Kip2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDKN1C para la investigación de la señalización de p57 Kip2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDKN1C críticos para la función de p57 Kip2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDKN1C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDKN1C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p57 Kip2 (h) y el plásmido HDR p57 Kip2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDKN1C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDKN1C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.