p54/nrb Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-424729-LAC

O gene **Nono** de camundongo codifica a p54/nrb (NONO), uma proteína nuclear multifuncional de ligação a RNA e DNA da família DBHS, que forma heterodímeros com SFPQ/PSPC1 para organizar paraspeckles e coordenar a transcrição, o splicing de pré‑mRNA e a retenção de RNA. A p54/nrb participa da resposta e do reparo a danos no DNA, incluindo funções na junção de extremidades não homólogas (NHEJ), e ajuda a acoplar a transcrição dependente de sinalização ao processamento de RNA por meio de interações com complexos associados à RNA polimerase II. Por regular programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e respostas ao estresse, alterações na atividade de NONO têm sido associadas à instabilidade genômica e a redes transcricionais aberrantes relevantes para câncer e fenótipos do neurodesenvolvimento. Como arcabouço para montagens ribonucleoproteicas, a p54/nrb também influencia a dinâmica de corpos nucleares e a regulação mediada por RNAs longos não codificantes, o que a torna um alvo útil para estudos mecanísticos da organização nuclear.

As Partículas de Ativação Lentivirais p54/nrb (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Nono numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais p54/nrb (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Nono, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de p54/nrb. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Nono e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.