Plásmido CRISPR de Activación (h) p38 alpha MAPK14: sc-400057-ACT

MAPK14 codifica p38 alfa, una quinasa de proteínas activada por mitógenos (MAPK) inducida por estrés que integra señales procedentes de citocinas, estrés osmótico, radiación UV y estímulos asociados a patógenos para regular la transcripción, la estabilidad del ARNm y la traducción de proteínas. p38 alfa (MAPK14) actúa dentro de la cascada MAPK aguas abajo de MKK3/MKK6 y modula efectores como ATF2, ELK1, MAPKAPK2/3 y HSP27, configurando la señalización inflamatoria, el control del ciclo celular, la diferenciación y la apoptosis. Es un nodo clave en vías de inmunidad innata e inflamación, incluidas las de TNF, IL-1 y TLR, e influye en la comunicación cruzada con NF-κB y programas de respuesta a interferón. La actividad desregulada de MAPK14 se ha implicado en inflamación crónica, respuestas de estrés neurodegenerativas, remodelado cardiovascular y múltiples fenotipos asociados al cáncer, lo que la convierte en una diana ampliamente estudiada para el mapeo de vías y la genómica funcional.

p38 alpha MAPK14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPK14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p38 alpha MAPK14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPK14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPK14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p38 alpha MAPK14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPK14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p38 alpha MAPK14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p38 alpha MAPK14 en células tumorales con expresión de MAPK14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.