p22-phox Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400325

Descripción general

CYBA codifica p22-phox, una subunidad de membrana esencial del complejo NADPH oxidasa (NOX2) de los fagocitos, que estabiliza gp91-phox/NOX2 y favorece el ensamblaje de la oxidasa activa en las membranas del fagosoma y la membrana plasmática. Al permitir la transferencia de electrones al oxígeno molecular, p22-phox es necesaria para la producción regulada de especies reactivas de oxígeno (ROS), que contribuye a la defensa antimicrobiana y a la señalización dependiente del estado redox en células inmunitarias innatas. Las ROS dependientes de CYBA influyen en vías relacionadas con la fagocitosis, la producción de mediadores inflamatorios y la dinámica del estallido oxidativo. La alteración genética o cambios en la expresión de CYBA se asocian con una actividad de NOX disminuida y se estudian en el contexto de fenotipos similares a la enfermedad granulomatosa crónica, desregulación inflamatoria y respuestas celulares vinculadas al estrés oxidativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO p22-phox (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYBA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYBA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYBA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p22-phox.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYBA para la investigación de la señalización de p22-phox, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYBA críticos para la función de p22-phox
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYBA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido p22-phox CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido p22-phox CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYBA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p22-phox (h) y el plásmido HDR p22-phox (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYBA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYBA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.